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影響ELISA試劑盒檢測原因
更新時間:2016-08-23   點擊次數(shù):757次

影響ELISA試劑盒檢測原因
ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法靈敏,特異性強不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。
標(biāo)本的影響
溶血標(biāo)本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽性[2]。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
標(biāo)本受細菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強烈振蕩。
塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
標(biāo)本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,ELISA試劑盒常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

 

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